实验报告

DHE染色实验报告

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一、实验器材及试剂

1、实验器材

名称	厂家	型号
冰冻切片机	赛默飞世尔科技有限公司	HM525 NX U
防脱载玻片	湖北百奥斯生物科技有限公司	BP0510
荧光显微镜	奥林巴斯有限公司	BX53
成像系统	3D HISTECH	Pannoramic SCAN Ⅱ
移液枪	大龙兴创实验仪器（北京）股份公司	YE169AA0033229

2、主要试剂及货号

名称	厂家	型号
OCT包埋剂	日本樱花SAKURA	4583
TBS缓冲盐粉	湖北百奥斯生物科技有限公司	BP0152
DHE染液	SigmaAldrich	D7008-10
抗荧光淬灭封片剂	Southern Biotech	0100-01

二、实验步骤

1、将切好的组织冰冻切片放置于室温复温20分钟。

2、按1:500配制DAPI工作液，避光染核3分钟。

3、TBST清洗切片，浸洗3次，每次5分钟。

4、将DHE原液用TBST按1:400比例配制成工作液。。

5、每张切片滴加50-100μl（视组织大小而定）DHE工作液，于湿盒内室温避光条件下反应1小时左右。。

6、TBST清洗切片，浸洗3次，每次5分钟。

7、用抗荧光淬灭封片剂封片，4℃避光保存。

8、显微镜下镜检，图像采集分析。

三、结果判读

DHE能够自由穿透细胞膜，进入细胞的DHE在ROS氧化下形成氧化乙啶，后者可以掺入到细胞核染色体的DNA中，形成红色的荧光。因此，细胞内红色荧光的强度与ROS的含量之间有一定的比例关系。

四、注意事项

1、DHE在光照和空气中易被氧化，注意避光密封保存。

2、DHE染色结果易淬灭，染色完成后应尽快镜检采图，以减少各种可能的误差。

3、DHE染色必须使用未固定的新鲜组织冰冻切片或活细胞进行染色。

4、荧光探针标记后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。

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