免疫荧光三标实验报告（细胞爬片）

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名称	公司	货号	浓度	修复方式	孵育条件

名称	公司	货号	浓度	孵育条件

4、注：一抗及二抗信息根据具体实验条件填写。

1、细胞爬片固定：未经固定的细胞用4%多聚甲醛固定10分钟。已固定的细胞室温放置10分钟，蒸馏水洗。用组化笔在爬片边缘画圈。

2、破膜：用0.1%Triton®X-100破膜15分钟。TBST洗3次，每次5分钟。

3、封闭：滴加与二抗来源一致的10%血清，37℃孵育30分钟。

4、孵育一抗：除去血清，分别取3种一抗原液，用TBST稀释，配制成一抗工作液，每张爬片滴加50-100μl（视细胞爬片大小而定）一抗工作液，4℃孵育过夜。

5、孵育二抗：第二天从冰箱拿出爬片，置于室温放置15分钟（复温），用TBST冲洗3次，再浸洗3次，每次3分钟。分别取3种二抗原液，用TBST稀释，配制成二抗工作液，每张爬片滴加50-100μl（视细胞爬片大小而定）二抗工作液，37℃孵育45分钟。TBST冲洗3次，再浸洗3次，每次3分钟。

6、染核：除去TBST，每张爬片滴加50-100μl（视细胞爬片大小而定）DAPI工作液（用DAPI原液1:500配制），避光染核5分钟后，用TBST冲洗。

7、封片：用荧光封片剂封片，4℃避光保存。

8、镜检：显微镜下镜检，图像采集分析。

DAPI通道细胞核为蓝色，488通道阳性为绿色，555通道阳性为橙红色，594通道阳性为红色，647通道阳性为紫红色。