试剂盒组成 | 规格 | 保存 |
溶液 A | 25 ml | 4℃避光 |
溶液 B | 25 ml | 4℃避光 |
本产品收到后按照上面指示温度存放,12个月内有效。
Western blot底物发光检测试剂可由标记于二抗上的辣根过氧化酶催化,产生化学发光反应,可以灵敏地检测出目的蛋白的存在。ECL底物化学发光检测试剂盒基于新一代增强型化学发光底物研制而成,并对成份做了优化。产品背景低,稳定性好,比普通ECL试剂敏感度高数十倍。它由辣根过氧化物酶(HRP)催化发生化学反应,发出荧光,可对X光胶片曝光,也可直接进行luminometer检测或者荧光CCD扫描。
1、按常规Western blot操作,二抗孵育后,进行最后一次洗涤时,根据膜的大小,按每10cm2膜混合0.5ml溶液A和0.5ml溶液B,混匀,配制成发光检测工作液。
2、用平头镊子将膜取出,膜的下缘轻轻接触吸水纸,以去除膜上多余的液体。膜的蛋白面朝上,置于洁净保鲜膜(某些市售保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光,应选择高质量保鲜膜)上。用吸管将配制的发光检测液转移到蛋白膜上,使其均匀覆盖,室温孵育1-2分钟。
3、用平头镊夹持蛋白膜,膜的下缘轻轻接触吸水纸,以去除膜上多余的液体。膜的蛋白面朝上,包裹于洁净保鲜膜内。轻轻赶出其间的气泡,固定在X片暗盒内。
4、在暗室中取一张X片置于包裹的膜上,合上暗盒,曝光30秒至1分钟。立即显影定影,根据其曝光强度,缩短或延长下一张X片的曝光时间(对微弱信号,曝光时间可延长至数小时),或者曝光0.5, 1,2,4,6分钟一系列后再显影定影挑选一张满意的。也可用合适的照相器材直接记录蛋白膜的化学发光图像。
1、如果储存使用时间过长,溶液B中过氧化氢可能随时间分解降低曝光敏感度,可取普通纯水按照每10ml纯水加入40µl 30%H202(商品化的H202一般为30%)比例配成新鲜H202溶液替代溶液B使用,可以完全恢复发光工作液最大发光敏感度,效果和新鲜的溶液B完全一样。
货号 | 名称 | 规格 | 价格 | 操作 |
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