BSP甲基化测序(Bisulfite Genomic Sequencing PCR)的原理通过对基因组DNA进行重亚硫酸盐处理,非甲基化的胞嘧啶被脱氨基而转变成尿嘧啶,在随后的PCR反应中尿嘧啶转变成胸腺嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不能被脱氨基,在反应完成时被保留,我们将扩增得到的PCR产物进行TA克隆测序,就可以分析甲基化发生的具体情况。该方法实验结果准确性高,是甲基化检测的金标准。
DNA提取-亚硫酸氢盐处理-纯化DNA-PCR扩增-胶回收-TA克隆-测序-数据分析-发送实验报告。
CpG岛分析图
甲基化位点图
1、动物组织:尽可能新鲜和足量的组织(>50-100mg,至少绿豆大小),保存于-80℃或者液氮。
2、细胞样本:细胞量要求:每个实验组细胞数量保证大于106以上;6孔板70-80%;T25培养瓶70-80%。
3、DNA样本:浓度≥50ng/μl、体积≥50μl的总DNA样品,DNA样品需保证DNA电泳主带清晰且无明显降解。
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