免疫组化IHC

服务介绍：

用标记的特异性抗体，对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量，进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学（immunohistochemistry）技术或免疫细胞化学（immunocytochemistry）技术。

本实验是将组织细胞内的抗原可视化过程，可直接在组织切片、细胞涂片或培养细胞爬片上原位显示某些蛋白质或多肽类物质，并可精确到亚细胞结构水平。载玻片上的组织细胞经过预处理（脱蜡至水、抗原修复等）后，孵育相应的抗体，此时抗原（多肽、蛋白质、外源性物质等）被第一抗体特异性识别结合，然后把第一抗体作为抗原继续通过第二抗体特异性识别结合（第二抗体上有标记特定物质），若第二抗体标记的特定物质为辣根过氧化物酶（HRP），可与DAB在特定条件下反应形成棕褐色沉淀，最后通过显微镜观察。

主要用途：

免疫组织化学技术可借助显微镜的显像与放大作用，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质（如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、酶、激素、病原体及受体等）。在病理学中，免疫组化技术常用来进行肿瘤的诊断及鉴别诊断，也可通过此技术对肿瘤进行更细化的分类。

检测原理：

根据抗原抗体反应（即抗原抗体特异性结合）和化学显色原理，引入附有标记物的外源性抗体（或抗原），使之锚定于组织或细胞标本中相应的抗原（或抗体），标记物经呈色反应来显示待检抗原（或抗体）。

实验流程：

脱蜡与水化-抗原修复-灭活内源性过氧化物酶和生物素-血清封闭-孵育一抗-孵育二抗-DAB显色-苏木素复染-脱水与透明-封片-显微镜镜检。

样本要求及运输条件：

1、提供固定合格的样本。组织离体后，选择合适的固定液立即固定，固定液的量建议大于组织体积的10-15倍，新鲜标本用合适的容器固定24-48h，大标本固定12h，再切开固定。标本常温（24℃左右）或冷藏（4℃）固定，切勿冷冻结冰，固定样本常温运输送样。

2、涂片和爬片必须充分固定，石蜡切片实验前需充分脱蜡。

3、提供准确的抗体信息。

注意事项：

1、客户提供的抗体，要求先做预实验，除了正式实验样本外，需客户提供预实验样本（预期高表达，蜡块和切片皆可）和阳性对照（若不能提供，可以协商由我司提供）。

2、抗体：一般指一抗（客户检测目的蛋白），需要客户提供准确的抗体名称、品牌货号，根据抗体货号可以确认抗体的应用（检测种属和检测方式）是否符合基本要求，否则存在风险，具体以预实验为准。接收抗体时，需确认抗体体积与保存温度，建议至少10μl，多余可返还。二抗由我司提供，若客户提供特殊来源的一抗（如：绵羊来源），需客户提供相应二抗。

3、预实验，通常采用3+1+1模式，即三个浓度梯度，一张阳性对照，一张空白对照。预实验确认效果后，再做正式实验，预实验我司可提供免费扫描并放置于服务器（可用网页直接浏览）。预实验结果优先由客户自行确认，并选择正式实验浓度，我司可协助推荐，但不对最终结果作保证，预实验和正式实验间隔周期不要太久，建议连续三周内完成。

4、同一个抗体用于不同种属、不同脏器，浓度都需做预实验确认（可以减少浓度梯度）。

5、正式实验的趋势我司不做保证。