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抗酸性染色法是指检查抗酸细菌（如结合杆菌、麻风杆菌、分枝杆菌等）的一种特殊染色法。方法很多，常用的是先以浓石碳酸复红加温初染，随即以盐酸酒精或硫酸水脱色，最后用美蓝液复染。
分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。
抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石碳酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。
主要用于细菌标本涂片或菌落涂片的染色，目前常用于对分枝杆菌属进行初步鉴别。
在淡蓝色背景下，抗酸性菌（如：结核杆菌、麻风杆菌、分枝杆菌）呈红色，其他细菌及细胞呈蓝色。
结核分枝杆菌多数为杆状、稍弯曲；菌体宽度0.3-0.6μm；菌体长度不一，在0.5-8μm之间，多数为1.5-3.5μm，少数菌体较长者可呈螺旋状；染色良好的结核分枝杆菌菌体内，能够发现着色较深的异染颗粒。
脱蜡-石碳酸复红染色-水洗-酸性酒精脱色-水洗-亚甲基蓝染色-水洗-封片-显微镜镜检。
1、提供固定合格的样本。组织离体后，选择合适的固定液立即固定，固定液的量建议大于组织体积的10-15倍，新鲜标本用合适的容器固定24-48h，大标本固定12h，再切开固定。标本常温（24℃左右）或冷藏（4℃）固定，切勿冷冻结冰，固定样本常温运输送样。
2、石蜡切片常温运输，细菌涂片常温运输。
1、涂片和切片必须充分固定，石蜡切片要充分脱蜡。
2、细胞核如果着色太深，可以再次分化。
3、酸性酒精溶液用完后，可自制5％盐酸酒精溶液（5ml浓盐酸与95ml 95%酒精混合）作为脱色液。
4、在同一个抗酸菌菌体上，有时会出现红色深浅不一的情况，观察时应予注意。
5、组织切片脱蜡时切忌使用二甲苯，脱蜡后不经酒精，避免高浓度酒精破坏菌体内的脂质。
6、亚甲基蓝溶液复染颜色不宜过深，否则易影响阳性菌的观察。
7、冬季室温过低时，染色时间应适当延长。
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